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多聚磷酸对GFP相态转变的影响

信息来源:www.xyglchem.com | 发布时间:2020年11月04日

多聚磷酸对GFP相态转变的影响,首 先,分别观测了LB培养基中表达了GFP的细菌与SMW培养基(低养分培养基)中细菌表达的GFP的状态。多聚磷酸厂家,多聚磷酸价格。实验结果显示,LB培养基中的细菌GFP均匀分散在菌体中,而SMW培养基中的细菌蛋白发生了明显的相分离,蛋白分别聚集于菌体的两端。由于两种培养基中细菌内多聚磷酸含量具有差异,因此设想这种相分离的发生与细菌内部的多聚磷酸有关。

接下来,利用阳离子染料DAPI对细菌内部的多聚磷酸进行染色,发现在发生相分离的细菌体中,GFP的绿色荧光点与多聚磷酸包裹的DAPI形成的黄色点发生重合,这则初步证实了多聚磷酸与蛋白的相互作用诱发了这种相分离行为。
动态过程显示,绿色荧光蛋白在浓度逐渐增高的多聚磷酸的作用下逐渐发生聚集,最后在30分钟时在细菌的两端形成蛋白微液滴结构。进一步的实验中,通过逐渐调节培养基中的养分浓度来控制细菌内的多聚磷酸含量,结果在60分钟时,GFP依旧发生了聚集。而反过来,逐渐提高培养基中的养分,原本聚集的GFP又分散开来。以上现象充分证明了多聚磷酸对GFP的相分离起到了重要作用。

多聚磷酸含量对蛋白聚集的影响
随后,在菌体外进行了液-液相分离机理的研究。首 先,发现未加入多聚磷酸的GFP溶液始终是澄清的,而加入了多聚磷酸的GFP溶液随时间推移发生浑浊,显微镜下可以明显观测到在该溶液中存在蛋白小液滴。以此现象为基础,通过调节多聚磷酸的链长以及阴阳离子的比例(R-/+)来对多聚磷酸与蛋白的相互作用机理进行评估。实验结果显示,多聚磷酸的存在对蛋白的相分离有明显的促进作用;并且随着多聚磷酸链长的增加,蛋白相分离的驱动力变大,越容易发生蛋白的液-液相分离;与此同时,电荷比对相分离现象也有明显的影响,R-/+越大,形成的液滴越大,即越容易发生相分离。